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植物茎尖组培实验过程 [复制链接]

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植物茎尖组培实验过程


植物茎尖组培实验过程--1、外植体的选取及预处理  ⑴外植体选取  选取生长健壮、已发芽、长势较好、无病害的生姜根状茎作为外植体。  ⑵材料预处理  取带芽的枝条或鳞茎球茎,洗衣粉适量冲洗,然后扳取或用清洁剪刀剪取带芽部位(约1cm1cm大小),顶芽和腋芽、大芽和小芽分开。继续用洗衣粉清洗10分钟,清洗时需不停晃动。再用自来水冲洗干净,置空培养瓶备用。  2、超净工作台无菌操作准备  检查超净工作台,是否已开机灭菌,酒精灯、酒精瓶、升汞是否齐备、无菌水、培养瓶放置与位置、接种器械是否齐备与放置。  3、外植体消毒  ⑴蒸馏水冲洗  外植体置于已杀菌开机的超净工作台上,新洁尔灭洗液消毒双手,无菌蒸馏水清洗外植体次,需随时晃动。  ⑵酒精消毒  75%酒精倒入装外植体的容器内,消毒外植体s,时间长短视植物材料情况而定,一般幼嫩材料和室内带菌培养材料消毒时间短,老材料或室外材料消毒时间长。动作一定迅速,需晃动,然后将酒精倒去。整个时间计算以酒精倾倒开始至酒精倒出瓶外为止,  ⑶升汞消毒  1%生汞倒入装外植体的容器内,消毒外植体min,时间长短视情况而定。需晃动,在最后3min静置,升汞注满容器,将已灼烧的镊子放入容器升汞内浸泡。  10%次氯酸钠溶液倒入装外植体的容器内,消毒外植体min,时间长短视情况而定。  ⑷蒸馏水清洗  用镊子将外植体取出,放入另一无菌蒸馏水瓶中清洗,反复清洗4次。  4、材料的整理  用灼烧冷却的镊子和剪刀对外植体进行处理,剥离外植体材料芽外部小叶片,露出尖端生长点和片叶原基部分,将此部分剪下做培养材料。再用无菌蒸馏水清洗次。  5、接入培养基  培养基瓶放入工作台内,将剥离的材料分别用消毒过的镊子放入培养瓶内,盖上瓶盖,置培养篮内,写上培养时间、操作人及培养品名,入培养室培养。

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